BCA法蛋白含量測定試劑盒說明書
微量法
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定，確保蛋白濃度在20-2000μg/ml內。
貨號：YX-W-C202
規格：100T/96S
產品內容：
試劑A：液體×1瓶，4℃保存。
試劑B：液體×1支，4℃保存。
標準品：液體×1支，4℃保存。
產品說明：
樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分析。 測定原理： 堿性條件下，蛋白質中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵，能將Cu2+還原成Cu+；2分子的BCA與Cu+結合，生成紫色絡合物，在540-595nm有吸收峰，562nm處吸收峰ZUI強。 自備儀器和用品：
臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、移液器和蒸餾水。
工作液配制：臨用前請根據擬用工作液體積（樣本數×0.2mL），將試劑A和B按照50：1的比例混合，蓋緊后充分混勻。
操作步驟：
一、樣品中可溶性蛋白質提取：
1. 液體樣品：澄清液體樣品可以直接測定。
2. 組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備，根據需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水），冰浴勻漿，10000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）
3. 細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后10000rpm，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
二、測定操作：
1. 可見分光光度計/酶標儀預熱30min，調節波長到562 nm，蒸餾水調零。
| 空白管 | 標準管 | 測定管 |
蒸餾水（μL） | 4 |
|
|
標準品（μL） |
| 4 |
|
待測液（μL） |
|
| 4 |
工作液（μL） | 200 | 200 | 200 |
混勻后置于60℃保溫30min，于微量玻璃比色皿/96孔板，于562nm處測定吸光值A，分別記為A空白管、A標準管、A測定管。 | |||
注意：空白管和標準管只需要做一次。
三、計算公式：
Cpr (mg/mL)= C標準品×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）
=0.5×（A測定管－A空白管）÷（A標準管－A空白管）
注意事項：
本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！
