本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷
牛（Bovine）血吸蟲病（Schistosoma）
ELISA 檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被血吸蟲病抗體的包被微孔中，依次加入標本、HRP標記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中血吸蟲病（Schistosoma）的存在與否。
樣品收集、處理及保存方法
1.
血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2.
血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。
3.
細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4.
組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。
5.
保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.
酶標儀（450nm）
2.
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.
37℃恒溫箱
操作注意事項
1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3. 預處理后的樣本請按照操作步驟用樣本稀釋液適當稀釋以達到試劑盒的的Z佳檢測效果。
4.
嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.
所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成：
名稱 | 96 孔配置 | 96 孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 12 孔×8 條 | 12 孔×4 條 | 無 |
陰性對照 | 0.5mL | 0.5mL | 0.5mL |
陽性對照 | 0.5mL | 0.5mL | 無 |
檢測抗原-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
底物 A | 6mL | 3mL | 無 |
底物 B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2 張 | 2 張 | 無 |
說明書 | 1 份 | 1 份 | 無 |
自封袋 | 1 個 | 1 個 | 無 |
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。
2. 自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。
2. 設置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各 50μL；
3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；
4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）
標記的檢測抗原 100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。
6.
每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7.
每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的
OD 值。
結果判斷
1.
試驗有效性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15。
2.
臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
3.
陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cutoff），樣品為陰性
4.
陽性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cutoff），樣品為陽性
試劑盒性能
1. 準確性：陽性對照孔 OD 值平均值≥1.00；陰性對照孔 OD 值平均值≤0.15，說明試驗結果有效。
2.
特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
3.
重復性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。
4.
貯藏：2-8℃，避光防潮保存。5. 有效期：6 個月
免責聲明
1.
試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。
2.
嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。
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