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蔗糖合成酶（分解方向；SS-Ⅰ）試劑盒說明書
微量法 100 管/48 樣
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義
蔗糖是源（葉片等）光合產(chǎn)物向“庫"器官運輸?shù)闹饕螒B(tài)。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是雙向反應(yīng)酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一。研究其分解方向 SS-Ⅰ的活性對于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意義。
測定原理
SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游離果糖和UDPG，采用3,5－二硝基水楊酸法測定還原糖的含量來反映酶活性的高低。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、離心機、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰
試劑的組成和配制
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二： 液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×2 支，-20℃保存；臨用前每支加入 1.2mL 試劑二充分溶解待用，現(xiàn)配現(xiàn)用； 試劑四：液體 6mL×1 瓶，4℃保存。
樣品測定的準備：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL
提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟
1、 分光光度計或酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定，（在 EP 管中依次加入下列試劑）：
試劑名稱（μL）測定管對照管
樣本1010
試劑三40
試劑一40
混勻，30℃準確水浴 30min 后，95℃水浴 10min 95℃水浴 5min 左右，冷卻至室溫
混勻，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，540nm 下測定各管吸光值。ΔA=A 測定-A 對照。每個測定管需要設(shè)一個對照管。
SS-Ⅰ活性計算
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0012x - 0.0492；x 為標準品濃度（μg/mL），y 為ΔA。
2、按照蛋白濃度計算
單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0012×V 反總]÷(V 樣×Cpr) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照樣本鮮重計算
單位定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g 鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0012×V 反總]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T
=138.9×(ΔA+0.0492) ÷W
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.05mL； V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。b.用 96 孔板測定的計算公式如下
1、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.0006x - 0.0492；x 為標準品濃度（μg/mL），y 為ΔA。
2、按照蛋白濃度計算
單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)= (ΔA+0.0492) ÷0.0006×V 反總]÷(V 樣×Cpr) ÷T
=277.8×(ΔA+0.0492) ÷Cpr
3、按照樣本鮮重計算
單位定義：每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個酶活力單位。
SS-Ⅰ活性(μg /min/g 鮮重) =(ΔA+0.0492) ÷0.0006×V 反總]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T
=277.8×(ΔA+0.0492) ÷W
V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.05mL； V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，30 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
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