K562/ADR K562耐阿霉素細(xì)胞株
K562 Resistant Adriamycin Cell Line
貨號(hào)：YJ-h119（STR鑒定）
價(jià)格： 2500.0
規(guī)格： 1*106
細(xì)胞介紹
K562/ADR為由K562細(xì)胞構(gòu)建的耐ADR藥物細(xì)胞株。
細(xì)胞特性
1）來(lái)源：人慢性髓系白血病細(xì)胞耐藥篩選 | 2）形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣；圓形，懸浮生長(zhǎng) |
3）含量：>1×10^6 細(xì)胞數(shù) | 4）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝 |
5）用途：僅供科研使用。 |
細(xì)胞運(yùn)輸、保存及注意事項(xiàng)
復(fù)蘇細(xì)胞 | 凍存細(xì)胞 | |
包裝 | 充液的T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 1mL凍存管 |
運(yùn)輸條件 | 常溫 | 干冰 |
保存方式 | 37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱 | -80℃冰箱中保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮 或立即復(fù)蘇 |
※注意事項(xiàng) | 1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞有污染；或凍存管有破損，融化、漏液等，請(qǐng)立即拍照并聯(lián)系我們。照片包括細(xì)胞培養(yǎng)瓶/凍存管外觀，顯微鏡下細(xì)胞照片（100倍，200倍各2張）； 2. 復(fù)蘇細(xì)胞的充液培養(yǎng)基為不含藥物的維持培養(yǎng)基，血清濃度較低，收到細(xì)胞后請(qǐng)及時(shí)更換為完全培養(yǎng)基； 3. 建議收到細(xì)胞后，首先進(jìn)行擴(kuò)增（至少3代），并凍存部分細(xì)胞以備用。 4. 初次培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)8×105個(gè)/mL時(shí)，可加入500ng/mL ADR的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞細(xì)胞密度達(dá)1×10^6個(gè)/mL后傳代。細(xì)胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至1ug/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過(guò)程中細(xì)胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度達(dá)8×105個(gè)/mL，且生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的ADR藥物濃度。 5. 細(xì)胞凍存過(guò)程中，不可添加藥物。 | |
細(xì)胞培養(yǎng)試劑的配制
1）ADR藥物的配制及保存
建議將ADR藥物配制成1mg/mL的母液，即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR藥物，使其完全溶解后，使用0.22um濾器過(guò)濾除菌。
注意：可根據(jù)用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致藥物失效。溶解后的ADR，4℃保存1周，-20℃保存1個(gè)月，-80℃保存6個(gè)月。
2）凍存液的配制
90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。（凍存液中不含藥物）
3）完全培養(yǎng)基的配制（推薦使用YJ-h119-001b）
成分 | 體積/濃度 |
優(yōu)質(zhì)胎牛血清 | 10% |
雙抗 | 1% |
1ug/mL ADR | 0.1%母液（1mg/mL） |
RPMI-1640培養(yǎng)基 | 補(bǔ)充至所需體積 |
細(xì)胞培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%~80%。
細(xì)胞處理
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4~6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻，1000rpm/min離心3~5min，棄去上清液。加入1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后，均勻鋪于含6~8mL完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中，置于37℃恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
注意：①細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中，不可使用含有藥物的培養(yǎng)基。須在細(xì)胞密度達(dá)約8×105個(gè)/mL時(shí)，方可添加500ng/mL ADR藥物；若細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較為緩慢，可適當(dāng)降低ADR的濃度（首次降低一半藥物濃度），或使用不含ADR的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)至細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的ADR濃度。
②建議復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)始終使用防護(hù)手套、衣服和戴上防護(hù)面罩，避免凍存管處于溫差較大情況下發(fā)生爆炸，造成人員傷害。
2）細(xì)胞傳代（建議以同等底面積的培養(yǎng)瓶/皿按照1：2比例傳代）
懸浮狀態(tài)下生長(zhǎng)的細(xì)胞，可以通過(guò)向培養(yǎng)瓶中添加完全培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，一般情況下細(xì)胞密度維持在1×105~1×10^6個(gè)/mL，可以維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。如需分瓶可以將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8mL按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
注意：細(xì)胞傳代1~2次后仍能保持增殖，即可提高藥物濃度至1ug/mL繼續(xù)培養(yǎng)；若此過(guò)程中細(xì)胞停止增殖，且狀態(tài)較差，則需降低藥物濃度（首次降低一半藥物濃度）或使用不含藥物的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約8×105個(gè)/mL，且生長(zhǎng)狀態(tài)較好時(shí)，再更換為所需的ADR藥物濃度。
3）細(xì)胞凍存
①細(xì)胞凍存時(shí)，收集細(xì)胞懸液到離心管中，1000rpm，離心5min，棄去上清。
②細(xì)胞計(jì)數(shù)后，加入配制好的細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，按照1×10^6 ~ 1×107個(gè)細(xì)胞/mL分配到一個(gè)凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
注意：細(xì)胞凍存過(guò)程中，不可添加藥物。
③將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80℃冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項(xiàng)
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十余年，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
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